Electroforesis y blotting

Electroforesis y blotting

La electroforesis es una técnica de separación de partículas cargadas eléctricamente, por lo que se denomina técnica separativa. La separación se realiza por migración diferencial bajo la acción de un campo eléctrico. La distancia recorrida y la velocidad de migración dependen de las características de la molécula, como su tamaño, geometría o carga eléctrica. Para la migración, se utiliza una matriz que es un soporte para guiar y ralentizar la migración de las moléculas con el fin de mejorar su separación. En la mayoría de los casos, esta matriz es un gel que puede tener diferentes composiciones en función de las moléculas que deban separarse (agarosa para los ácidos nucleicos o poliacrilamida para las proteínas, por ejemplo).  La elección del soporte depende de la naturaleza de las moléculas a identificar. Por ejemplo, las moléculas muy pequeñas en un gel con poros demasiado grandes no se frenarán lo suficiente y, por tanto, se identificarán mal. Por el contrario, las moléculas grandes en una malla demasiado fina quedarán completamente bloqueadas. En general, la agarosa se utiliza para moléculas grandes, por ejemplo para separar ADN y ARN. La acrilamida y la bisacrilamida forman mallas mucho más finas, por lo que son adecuadas para separar moléculas de menor peso molecular, como las proteínas.